ABTS esė
Tai analitinis metodas, kuriame naudojamas spektrofotometrinis matavimas, kad būtų galima nustatyti mėginio antioksidacinį pajėgumą. UV-Vis spektrofotometras yra naudojamas matuoti tirpalo, turinčio ABTS + + radikalą, sugerties, susidariusios oksiduojant bespalvę ABST (2, 2'-azinobis (3-etilbenzotiazolin-6-sulfonatą)) medžiagą, absorbciją. radikalinė medžiaga yra dažoma sugeriant būdingus bangų ilgius matomame intervale. Antioksidantų molekulių pridėjimas prie ABTS • + tirpalo, kuris gali veikti per vandenilį ir elektronų perdavimą, lemia radikalo sumažėjimą iki bespalvės formos, Dėl to spalvos pakitimas, kuris yra proporcingas esamo antioksidanto kiekiui, gali būti matuojamas kaip absorbcijos sumažėjimas tam tikru laiku esant tam tikram bangos ilgiui (734 nm). Antioksidacinė galia išreiškiama lyginant su absorbcijos vertės, išmatuotos žinomu kiekiu antioksidanto molekulės, pasirinktos kaip etaloninis standartas, kuris paprastai yra askorbo rūgštis arba Trolox (šiuo atveju kalbama apie „TEAC Trolox Equivalent Antioxidant Capacity“ antioksidantų aktyvumą).
Antioksidantų galios matavimas, pagrįstas ABTS naudojimu, yra paprastas ir greitas. Be to, jis leidžia matuoti tiek hidrofilinius, tiek lipofilinius antioksidantus plačiame pH diapazone. Tačiau reikia nepamiršti, kad naudojamas radikalas (ABTS • +) nėra fiziologinis ir nėra biologinėse sistemose ir kad dažnai matomos pakartotinumo matavimo problemos, susijusios su įvairių antioksidantų reakcijos kinetika.
FRAP (geležies mažinimo antioksidantas)
FRAP bandymu nustatomas antioksidantų gebėjimas sumažinti geležies jonų kiekį. Tai metodas, pagrįstas elektronų perdavimu, kuriame geležies jonai pereina iš Fe3 + į Fe2 +. Tam tikromis pH (3.6) sąlygomis ir esant TPTZ (2, 4, 6-tris (2-piridil) -s-triazinui) šie jonai sudaro skirtingų savybių kompleksus, ypač sumažintą darinį (Fe2 + -TPTZ) yra mėlynos spalvos, kurios maksimali absorbcija yra 593 nm, kuri gali būti matuojama spektrofotometriškai. Todėl antioksidacinės medžiagos redukcinis pajėgumas gali būti matuojamas kaip tirpalo, turinčio oksidantą, absorbcijos bangos ilgio, nustatyto palyginimui su standarto (pvz., Askorbo rūgšties), palyginimas.
FRAP bandymas buvo skirtas plazmos redukcinei galiai matuoti, bet buvo pritaikytas grynų junginių ir kompleksinių matricų antioksidaciniam pajėgumui išbandyti. Iš tiesų, kadangi šis metodas leidžia įvertinti tik mažinimo pajėgumus pernešant elektronus, visiškai ignoruojant antioksidantų, veikiančių per vandenilį, poveikį, jis neleidžia matuoti molekulių, tokių kaip tioliai ir baltymai, kurie vaidina antioksidacinį vaidmenį, indėlį. biologiniuose skysčiuose (pvz., kraujyje). Šio metodo pranašumas yra tas, kad jis yra vienas iš paprasčiausių, greičiausių ir pigiausių metodų, nustatančių in vitro antioksidantų pajėgumą.
TEST DPPH
2, 2-difenil-1-pikilidrazilas (DPPH •) yra labai stabilus ir komerciškai prieinamas azoto radikalas, pasižymintis intensyvia raudona-violetine spalva, kuri išnyksta, kai ji sumažinama esant molekulei su antioksidaciniu pajėgumu. Spektrofotometriniu būdu matuojant DPPH tirpalo absorbcijos variacijos 517 nm bangos ilgį po reakcijos su antioksidaciniu junginiu, galima kiekybiškai ištirti bandomosios medžiagos redukcinį pajėgumą, nesvarbu, ar jis veikia vandenilio perdavimu, ar elektronų perdavimu. Rezultatas paprastai išreiškiamas kaip IC50, t. Y. Antioksidanto kiekis, galintis sumažinti 50% pradinę DPPH koncentraciją.
Tai greitas, paprastas ir ekonomiškas metodas. Šios analizės metodo ribas lemia galimybė, kad analizės rezultatai yra falsifikuoti tuo atveju, kai bandomosios molekulės sugeria tą patį bangų ilgį, kaip ir DPPH radikalai, arba esant didelėms steriliai apkrautoms molekulėms, kurios nėra jie reaguoja su reaktyvia šaknies dalimi. Tai nustato, kad DPPH reaguoja su antioksidantais iki 1000 kartų lėčiau nei peroksilo radikalai.
PCL TEST (fotochemiluminescencija)
PCL tyrimas grindžiamas specifinės radikalų rūšies - superoksido anijono (O2 • -), susidariusio fotochemiškai UV spinduliuote, reakcija su junginiu, galinčiu išskirti chemiluminescenciją. Naudojamas žymeklis yra luminolis, molekulė, kuri, oksidavus laisvaisiais radikalais, skleidžia šviesą, kuri gali būti matuojama naudojant specialų instrumentą (Photochem®). Antioksidantų buvimas raciono mišinyje deaktyvuoja radikalų rūšis, slopindamas chemiluminescencijos emisiją. PCL analizė yra labai greita ir jautri. Be to, taikant du skirtingus analitinius protokolus, vadinamus ACW (antioksidantų talpa vandenyje tirpūs) ir ACL (antioksidantų talpa lipidų tirpūs), gali būti išmatuojamas ir bendras vandenyje tirpaus komponento (flavonoidų, vitamino) bendras antioksidacinis pajėgumas. C, aminorūgštys ir pan.), Lipos tirpių medžiagų (tokoferolių, tokotrienolių, karotinoidų ir tt). Lyginant su matavimais registruotas vertes, susijusias su standartinėmis etaloninėmis molekulėmis, askorbo rūgštimi ACL protokolui ir Trolox ACW protokolui, gaunamas tiriamojo produkto antioksidantas.
